實(shí)時(shí)熒光PCR試劑盒是用于實(shí)時(shí)定量PCR(Polymerase Chain Reaction)反應(yīng)的試劑盒。實(shí)時(shí)PCR是一種通過檢測靶基因熒光信號(hào)的強(qiáng)度來實(shí)時(shí)監(jiān)測PCR反應(yīng)進(jìn)程的技術(shù)。測量原理主要包括以下幾個(gè)方面：
 

　　1.DNA擴(kuò)增：實(shí)時(shí)PCR試劑盒中包含了DNA聚合酶，其能夠與反應(yīng)體系中的模板DNA結(jié)合，并在適當(dāng)?shù)臏囟认逻M(jìn)行DNA鏈的合成和擴(kuò)增。
 

　　2.靶基因檢測：加入了與目標(biāo)基因序列相對(duì)應(yīng)的引物(primer)和探針(probe)。引物是一種短的DNA片段，能夠與目標(biāo)基因的特定序列互補(bǔ)結(jié)合，從而在PCR反應(yīng)中起到引導(dǎo)DNA合成的作用。探針是一種含有熒光染料和熒光信號(hào)猝滅物(quencher)的DNA序列，其與目標(biāo)基因的特定序列互補(bǔ)結(jié)合后，熒光信號(hào)被猝滅，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)PCR產(chǎn)物的檢測。
 

　　3.熒光信號(hào)檢測：在實(shí)時(shí)PCR過程中，擴(kuò)增產(chǎn)物數(shù)量隨著反應(yīng)的進(jìn)行逐漸增加，同時(shí)探針與擴(kuò)增產(chǎn)物結(jié)合，使熒光信號(hào)減弱。通過實(shí)時(shí)熒光PCR儀器可以在每個(gè)PCR循環(huán)后測量熒光信號(hào)的強(qiáng)度，根據(jù)熒光信號(hào)的變化可以確定擴(kuò)增產(chǎn)物的數(shù)量。實(shí)時(shí)PCR儀器一般會(huì)設(shè)置閾值來判斷是否存在目標(biāo)基因，當(dāng)熒光信號(hào)強(qiáng)度超過閾值時(shí)，表示PCR反應(yīng)中存在目標(biāo)基因。
 

　　4.定量測量：通過測量PCR循環(huán)次數(shù)(CycleThreshold，CT值)來實(shí)現(xiàn)基因定量。CT值是從熒光曲線中判斷的某一點(diǎn)，即在此點(diǎn)上熒光信號(hào)超過閾值。CT值越小，說明目標(biāo)基因的起始模板數(shù)量越多，反之則起始模板數(shù)量較少。通過與已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行比較，可以計(jì)算出樣本中目標(biāo)基因的初始數(shù)量。
 

　　實(shí)時(shí)熒光PCR試劑盒的應(yīng)用非常廣泛，包括：
 

　　1.基因表達(dá)分析：可以檢測和定量分析特定基因在不同組織、細(xì)胞或時(shí)間點(diǎn)中的表達(dá)水平。
 

　　2.突變檢測：可以用于檢測和鑒定DNA序列中的突變或基因突變體。
 

　　3.微生物檢測：可以用于檢測和鑒定病原微生物、細(xì)菌或病毒的存在和數(shù)量。
 

　　4.基因拷貝數(shù)定量：可以用于檢測和定量分析基因的拷貝數(shù)變化，如染色體異常等。